Naprawa DNA przez ERCC1 w niedrobnokomórkowym raku płuc i chemioterapię adiuwantową opartą na cisplatynie cd

Przedstawiciele Eli Lilly mieli dostęp do wczesnego projektu manuskryptu w celu uzyskania informacji, ale poza tym nie mieli żadnego wkładu do rękopisu. Członkowie komitetu sterującego odpowiadali za decyzję o publikacji manuskryptu. Immunobarwione dla ERCC1
Zastosowaliśmy standardowy protokół do immunobarwienia próbek. W skrócie, w celu pobrania epitopów próbki eksponowano na 10 mM bufor cytrynianowy (pH 6,0) i ogrzewano przez 30 minut w łaźni wodnej. Skrawki guza inkubowano przez 60 minut z monoklonalnym przeciwciałem swoistym wobec pełnej długości ludzkiego białka ERCC1 w rozcieńczeniu 1: 300 (mysz, klon 8F1, Neomarkery) .27-30 Wykryto wiązanie przeciwciała za pomocą zestawu ABC z NovaRED. jako substrat (Vectastain Elite, Vector Laboratories) i Mayer Hematoxylin jako kontrast. Skrawki normalnych tkanek migdałków włączono jako zewnętrzne kontrole pozytywne, a komórki zrębu otaczające obszar guza służyły jako wewnętrzne kontrole pozytywne.
Analiza mikroskopowa
Dwóch badaczy, którzy nie byli świadomi danych klinicznych, niezależnie oceniało barwienie ERCC1 pod mikroskopem optycznym przy powiększeniu 400 x. Zanotowali, czy nowotwór czy komórki zrębowe eksprymują ERCC1. Intensywność barwienia oceniano w skali od 0 do 3 (z wyższą liczbą wskazującą wyższą intensywność iz komórkami śródbłonka w tkance kontrolnej migdałków stosowanymi jako odniesienie i przypisano intensywność 2). Dyskutowane przypadki zostały sprawdzone. Przypadki bez ważnej kontroli wewnętrznej zostały wyłączone. Pięć obrazów reprezentatywnych obszarów uzyskano przy powiększeniu 400 × dla każdej próbki. Łącznie 500 do 1500 pozytywnych lub negatywnych jąder nowotworowych na próbkę zostało ręcznie policzonych na ekranie komputera przy użyciu darmowego oprogramowania ImageJ z National Institutes of Health (http://rsb.info.nih.gov/ij). Procent dodatnich jąder nowotworu obliczono dla każdej próbki i przypisano partyturę punktową (0 jeśli 0%, 0,1 jeśli 1% do 9%, 0,5 jeśli 10% do 49%, i 1,0 jeśli 50% lub więcej), jako poprzednio opisano 31, 32. Ten wynik proporcji pomnożono przez intensywność barwienia jąder w celu uzyskania końcowego półilościowego wyniku H. Mediana wartości wszystkich wyników H została z góry wybrana jako punkt odcięcia dla oddzielenia guzów ERCC1-dodatnich od nowotworów ujemnych pod względem ERCC1.
Analiza statystyczna
Podobnie jak w badaniu IALT, pierwotnym punktem końcowym był całkowity czas przeżycia po randomizacji. Przeżycie bez choroby analizowano jako drugorzędowy punkt końcowy. Aby zidentyfikować dowolne błędy selekcji w uczestniczących ośrodkach, porównano wyjściową charakterystykę dwóch grup pacjentów (z blokami tkanki nowotworowej lub bez nich) z zastosowaniem testów chi-kwadrat podzielonych na straty według centrum, a ogólne wskaźniki przeżywalności w porównaniu z użyciem modelu Coxa. Dane wyjściowe według statusu ERCC1 porównywano w analizach jednowymiarowych z użyciem testów chi-kwadrat oraz w wielowymiarowym modelu logistycznym obejmującym wszystkie zmienne o wartościach P mniejszych niż 0,05.
Wskaźniki przeżycia oszacowano za pomocą metody Kaplana-Meiera. Wartości prognostyczne statusu ERCC1 i chemioterapii badano przy użyciu modelu Coxa, który był stratyfikowany zgodnie z ośrodkiem i dostosowany do istotnych czynników prognostycznych dla przeżycia (płeć i stadium choroby) i czynników związanych z ERCC1 (wiek, zmieniony typ histopatologiczny, a także obecność lub brak inwazji opłucnej)
[przypisy: determinanty zdrowia definicja, umowa z lekarzem medycyny pracy, diabetolog radom ]
[więcej w: olx tomaszów lub, olx witkowo, usg nadgarstka warszawa ]